微量凯氏定氮法的测定调整分析

凯氏定氮法测定蛋白质含量具有一定的准确度，在物质蛋白含量的测定中运用比较广泛。但凯氏定氮法也存在着一些不足之处，如消化时间长、环境污染大、滴定终点不易控制等。鉴于此，在传统凯氏定氮法的基础上，对试验装置如凯氏定氮仪和操作方法进行一些改进，可以大大提高测定蛋白质的效率，并且降低了测定过程中对空气的污染。

凯氏定氮法的原理如下：总共包括四个步骤消化、蒸馏、吸收和滴定。首先消化过程为将含氮化合物和浓硫酸共热，将有机氮转化为无机氮硫酸铵，具体方程式为2NH2+H2S04+2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4做催化剂）。之后就是蒸馏和吸收，将消化完的样品转移到定氮仪蒸馏装置，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵。此过程用公式表示为（NH4）2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4 　　2NH3+4H3BO3＝（NH4）2B4O7+5H2O。 zui后一步骤为滴定，用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。此时反应式为（NH4）2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3。这样，整个凯氏定氮法的过程，就通过这几个方程式，全部体现出来了。

而对于凯氏定氮法的改进，主要体现在：1.消化装置的组装：将原微量凯氏定氮法需要固定的凯氏烧瓶换成不需要固定的250mL的锥形瓶，同时在瓶口倒置一漏斗，漏斗颈顶部用玻璃弯管连接，弯管再用导管与内盛稀碱溶液的大烧杯相连。2.消化过程：将样品放入锥形瓶中，然后加入浓硫酸，当装置安装完毕后，放在通风橱中，打开电炉，对烧瓶直接加热，进行消化。起初用小火并随时调节火的大小，使产生的烟气被碱液*吸收；待内容物全部炭化，泡沫*停止后加强火力，随时转动烧瓶，使瓶壁上的内容物全部回流入消化液中，烧至溶液透明，沉淀灰白，取下待冷。3.测定过程：在100mL锥形瓶内加入15mL体积分数为1%硼酸吸收液，置于冷凝器下，并使管口浸入硼酸内，夹紧放气口，取10mL样品稀释液或空白液由进样口注入反应室。以5mL蒸馏水冲洗样口，用量筒量取5mL质量分数25%NaOH，迅速倒入进样口，并立即塞好，加水于进样口，以防氨逸出，从第1滴溜液滴下开始计时，蒸馏3min，移动吸收瓶，使硼酸液面离开冷凝管口，再蒸馏1min，然后用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端，从而保证了游离氨被*蒸馏接收。此时我们要确定氨气*被吸收记录下消耗的酸的体积。此时继续夹紧排气口，提起进口塞，使蒸馏水流入反应室，捏紧进气橡皮管，以断绝蒸汽源。这时反应室中的废液被自动吸出，如此反复冲洗干净反应室，将排气阀打开，使反应室外层中的废液排出。

对于凯氏定氮法进行改进后，能提高定氮的效率，同时减少污染，而且操作更加简单。另外，其测定结果跟用全自动定氮仪测出来的结果几乎没有差别。因此，我们在测定蛋白质含量或者氮元素含量的时候，需要慎重选择测定方法，以提高其测定结果度以及测定效率。